一种高效准确检测瓜氨酸含量的方法与流程
来源：bob网站 发布时间：2025-11-29 20:47:37
1、瓜氨酸是一种常见于水果、蔬菜中的氨基酸，其主要用途是提高人体免疫系统、维护关节运动机能、平衡血糖和胆固醇维持正常水平、维护肺健康、提高脑力清晰度等。 2、在瓜氨酸的实际生产中，其终产品含量明确要求不低于98.5％，因此就需要有满足检测其含量的方法，现有方法中主要有凯氏定氮仪法、高效液相色谱柱前衍生法等。凯氏定氮仪法其检验测试过程费时，同时因其是通过检验测试氮含量来换算瓜氨酸含量，因此在换算过程有可能计入其他氨基酸，检测准确度较差；柱前衍生法则衍生过程较复杂，检验测试过程准确度也大打折扣。申请号为49的专利公开了一种l-瓜氨酸的高效液相检测方法，其采用氨基键合硅胶柱作为色谱柱，以0.05mol/l磷酸二氢钾缓冲液与乙腈的混合溶液(体积比为60∶30～40)作为流动相，柱温为25～35℃，流速为0.7～1.0ml/min，在200～210nm的检测波长下可快速测定出l-瓜氨酸的含量，但其检测定量限为5.025μg/ml，且经实际验证该法的拖尾因子达到1.5，不符合方法学要求0.8-1.2，其色谱柱采用氨基键合硅胶柱，耐受性差，色谱柱寿命短(基本在1-3个月)，相对检测成本高，故在瓜氨酸含量检测中，其检测精度和检测效果都还有待进一步提高。 1、针对现存技术对瓜氨酸含量检测准确性较差，操作的流程较复杂、定量限偏高的问题，本发明的目的是提供一种高效准确检测瓜氨酸含量的方法。该法根据瓜氨酸物质结构、分配系数特点，选择两性离子型亲水作用色谱柱(hilic-z)作为固定相，结合适合比例的流动相，调整参数，开发出适合瓜氨酸检测的方法，、该方法检验测试快速、简便、准确不需要衍生。 3、1)采用高效液相色谱检测已知浓度的瓜氨酸标准品溶液，得出浓度-色谱峰定量参数相关性； 4、2)在与步骤1)相同的检验测试条件下检测待测样品的色谱峰定量参数，基于浓度-色谱峰定量参数相关性，得到待测样品中瓜氨酸含量； 6、其中，以体积比2.0-4.0：6.0-8.0(具体可为30：70)混合的磷酸二氢钾缓冲液和乙腈的混合液为流动相； 7、所述磷酸二氢钾缓冲液的浓度可为0.04-0.06mol/l，具体可为0.05mol/l，用磷酸调节ph为2-4，具体可为3.0。 10、其中，所述高效液相色谱中检测器为紫外吸收检测器；紫外检测波长202-208nm，具体可为206nm。 11、进一步地，所述高效液相色谱所用色谱仪可为岛津lc-16高效液相色谱仪或具有紫外可见检测器的安捷伦液相色谱仪； 14、优选地，所述瓜氨酸标准品溶液和/或待测样品溶液在进样检测前还进行如下处理：过0.2μm水系膜。 16、其中，色谱峰定量参数为色谱峰高或峰面积；进一步地，浓度-色谱峰定量参数相关性为峰高-浓度标准曲线或浓度-峰高线性回归方程，或峰面积-浓度标准曲线或浓度-峰面积线、本发明的有益效果在于： 18、(1)本发明根据瓜氨酸物质结构、分配系数特点，选择两性离子型亲水作用色谱柱(hilic-z)作为固定相，利用hilic-z对瓜氨酸有较好的保留，配制特定流动相对其进行洗脱，检测响应值高、峰形对称性好，检验测试灵敏度高，理论塔板数＞8000，分离度＞1.5，用本发明的色谱条件进行定量限检测，测得l-瓜氨酸的定量限为0.45μg/ml，该方法的检测精度和准确度满足瓜氨酸含量检测要求。 19、(2)本发明方法相较于凯氏定氮仪法，检测时效大幅度提升，凯氏定氮仪法单个样品从消解到检测结束需要5-6小时，本发明方法中单个样品检测仅需22分钟，且检测准确度高，精密度好；相较于柱前衍生法，本发明方法无需衍生，检验测试过程简便，精密度和准确度更高。 20、(3)本发明采用hilic-z作为固定相，用于检测瓜氨酸含量，该色谱柱耐受性好，其价格仅为氨基键合硅胶柱一半左右，价格实惠公道，检测成本低。 1.一种高效准确检测瓜氨酸含量的方法，包括下述步骤：1)采用高效液相色谱检测已知浓度的瓜氨酸标准品溶液，得出浓度-色谱峰定量参数相关性；2)在与步骤1)相同的检验测试条件下检测待测样品的色谱峰定量参数，基于浓度-色谱峰定量参数相关性，得到待测样品中瓜氨酸含量，其特征是，所用色谱柱为两性离子型亲水作用色谱柱。 2.根据权利要求1所述的高效准确检测瓜氨酸含量的方法，其特征是：以2.0-4.0：6.0-8.0体积比混合的磷酸二氢钾缓冲液和乙腈混合液为流动相； 3.根据权利要求1或2所述的高效准确检测瓜氨酸含量的方法，其特征是：所述流动相的流速为0.6-1.0ml/min。 4.根据权利要求1或2所述的高效准确检测瓜氨酸含量的方法，其特征是：所述高效液相色谱中柱温为30-40℃。 5.根据权利要求1所述的高效准确检测瓜氨酸含量的方法，其特征是：所述高效液相色谱中检测器为紫外吸收检测器；紫外检测波长202-208nm。 6.根据权利要求1所述的高效准确检测瓜氨酸含量的方法，其特征是：所述瓜氨酸标准品溶液和/或待测样品溶液在进样检测前还进行如下处理：过0.2μm水系膜。 7.根据权利要求1所述的高效准确检测瓜氨酸含量的方法，其特征是：所述色谱峰定量参数为色谱峰高或峰面积。 8.根据权利要求2所述的高效准确检测瓜氨酸含量的方法，其特征是：采用磷酸调节磷酸二氢钾缓冲液ph为2-4。 本发明公开了一种高效准确检测瓜氨酸含量的方法，利用基于两性离子型亲水作用色谱柱的高效液相色谱检测瓜氨酸含量，包括下述步骤：1)采用高效液相色谱检测已知浓度的瓜氨酸标准品溶液，得出浓度‑色谱峰定量参数相关性；2)在与步骤1)相同的检验测试条件下检测待测样品的色谱峰定量参数，基于浓度‑色谱峰定量参数相关性，得到待测样品中瓜氨酸含量。本发明方法相较于凯氏定氮仪法，检测时效大幅度提升，且检测准确度高，精密度好；相较于柱前衍生法，本发明方法无需衍生，检验测试过程简便，精密度和准确度更高。